(ESPECIAL)
La tecnología permite crear nuevas herramientas innovadoras y eficientes para resolver de forma sostenible las crecientes necesidades del sector agropecuario, sin provocar un agotamiento o degradación de sus recursos. El avance tecnológico en el diagnóstico de brucelosis no es la excepción. La NORMA Oficial Mexicana (NOM-041-ZOO-1995), Campaña Nacional contra la Brucelosis en los Animales, no ha sido actualizada desde hace 22 años, con su consecuente falta de integración de las nuevas tecnologías.
Recapitulando nuestra publicación del pasado 14 de mayo, por este mismo medio, en 2005 un grupo de investigadores internacionales (incluido el Dr. Bruno Garin-Bastuji, representante del Laboratorio de Referencia para Brucelosis en la Unión Europea y de la OIE/ FAO) utilizó con gran éxito la ELISA HAPTENO NATIVO y reconoce que las pruebas serológicas que detectan LPS-O pueden generar "Falsos Positivos" por reacciones cruzadas con bacterias Gram negativas incluyendo: Vibrio cholerae, Escherichia coli O:157, Salmonella y Yersinia enterocolitica O:9, siendo Yersinia la causa más frecuente y significativa de "falsos positivos", ya que sus niveles de anticuerpos anti LPS-O en suero y leche que cruzan con Brucella, suelen ser altos, persistentes y fluctuantes. La reacción cruzada entre Yersinia y Brucella se debe a su fuerte similitud de las cadenas de LPS-O. Estudio basado y referenciado en 68 artículos científicos, que reconoce hasta un 15% de "falsos positivos" en zonas libres de Brucella en la Unión Europea, y que, en programas avanzados de erradicación se requiere un diagnóstico diferencial con una prueba confirmatoria diferente a LPS-O (1). Todas las pruebas convencionales, tanto de Control Interno como las Oficiales marcadas en la NOM-041-ZOO-1995, para leche y sangre, miden anticuerpos anti LPS-O. LPS-O es el primer anticuerpo, ya que es la estructura más externa e inmunodominante de la Brucella y de las Gramm negativas, generando fácilmente la producción de anticuerpos. Por ello, las pruebas convencionales deberían ser consideradas como pruebas presuntivas.
A pesar de haber eliminado un gran número de Fluorescencia polarizada (FPA) positivas de su Hato, y dado que las reacciones cruzadas seguirán eternamente apareciendo, Usted siempre seguirá teniendo animales positivos a LPS-O (ya sea por FPA, Tarjeta, Rivanol, ELISA LPS). Esto significa que en su ¨hato negativo¨ le seguirán ¨brincando pocas¨. Sin embargo, esas ¨pocas¨ representan el 1% mensual de falsos positivos, que le sumarán un desecho adicional de aprox. 10-15% anual, sólo por concepto de Brucella.
Por otro lado, la fluctuación de anticuerpos anti LPS-O debido a dichas reacciones cruzadas, ya sean infecciones clínicas y/o subclínicas, también se verá reflejado en su tanque de leche, el cual resultará positivo a ELISA LPS y/o Anillo en leche, con el consecuente castigo en el precio, puesto que NO es posible saber si esa leche, catalogada como brucelosa, era positiva debido a otros motivos. Es muy frecuente encontrar tanques (o pipas) positivo a ELISA LPS y a Anillo en leche, pero negativo a ELISA HAPTENO NATIVO (HN). Así mismo, también se presenta el caso de Anillo en leche positivo, con ELISA LPS y ELISA HN negativos. Estos dos escenarios se han presentado en las pipas que han sido rechazadas por el estado de Chihuahua, y que algunas de las cuales provienen de Hatos Negativos.
El estress del parto genera infecciones subclínicas, principalmente mastitis, por ello su corral de frescas le genera tanque positivo. No se angustie, sólo es LPS-O. No es rentable eliminar vacas recién paridas por resultados "falsos positivos" a FPA o Tarjeta-Rivanol. Si su leche es evaluada midiendo anticuerpos anti LPS-O ¿Se imagina el problema que tendrá en la época de partos…?
Esto es un problema que no tiene fin, pues a pesar de haber eliminado todas sus FPA positivas, adicionalmente su tanque vuelve a ser positivo, lo cual obliga a volver a muestrear corrales, y seguir eliminando animales… cuando LPS-O seguirá eternamente presente en su establo. Mientras se mida LPS-O en el tanque de leche (a través de ELISA o Anillo en leche) y en suero sanguíneo (a través de FPA, Tarjeta-Rivanol, Fijación de complemento, ELISA) aunque el ganadero se esfuerce por eliminar la Brucella, nunca dejará de tener algún(os) tanque(s) positivo(s). Llegará el día en que Ud. lo perciba, lo cuantifique y se canse de esta interminable eliminación de vacas. La solución sólo es posible midiendo el anticuerpo específico Hapteno Nativo (HN) en tanque de leche y sangre.
1. Muñoz, P.M., C.M. Marín, D. Monreal, D. Gonzalez, B. Garín-Bastuji, R. Díaz, R.C. Mainer-Jaime, I. Moriyón, and J.M. Blasco. (2005). Efficacy of Several Serological Tests and Antigens for Diagnosis of Bovine Brucellosis in the Presence of False-Positive Serological Results Due to Yersinia enterolítica O:9 American Society for Microbiology.
Anticuerpo anti-HAPTENO NATIVO (HN): específico de Brucelosis
Es el segundo anticuerpo que se presenta en una brucelosis, ya que HN es una pequeña estructura ubicada dentro de la Brucella, y la aparición de anticuerpos sólo se produce cuando el sistema inmune de la vaca está expuesto prolongadamente a la infección. Esto hace que los anticuerpos anti Hapteno Nativo (HN) sean muy específicos en el diagnóstico de brucelosis. HN ha sido utilizado desde el siglo pasado, pero por el método de IDR (Inmunodifusión Radial) en gel.
La OIE (Organización Internacional de Epizootias) reconoce la alta sensibilidad del método ELISA, así como también reconoce la alta especificidad del antígeno Hapteno Nativo, y su aplicación como prueba confirmatoria. Hapteno Nativo, antígeno ESPECÍFICO para brucelosis, a través del Método ELISA, altamente SENSIBLE, esta combinación hace que la ELISA HAPTENO NATIVO (HN) sea una innovación tecnológica y la mejor opción en el mercado como prueba Confirmatoria que mide anticuerpos anti HN, para evitar pérdidas por eliminación de "falsos positivos" emitidos por todas las pruebas que miden anticuerpos anti LPS-O.
En Estados Unidos y la Unión Europea todos los animales brucelosos se van al sacrificio. Esta medida es posible porque el gobierno de aquellos países sí puede subsidiarlo. Sin embargo, el problema continúa, ya que está comprobado científicamente que en países libres de Brucella en la Unión Europea, siguen teniendo el 15% anual de animales positivos a LPS-O debido a reacciones cruzadas con bacterias Gramm negativas.
En 2016, en un estudio en el estado de Aguascalientes (6,699 muestras) y en Jalisco (4,291 muestras), se encontraron los siguientes Rivanoles positivos (mayores a 1:100) y por tanto, generando un desecho anual (únicamente por brucella) de 15.70% y 25.43% respectivamente. El porcentaje mayor en Jalisco, se debe al uso de vacunación con S19. Sin embargo, en dicho estudio se incluyen Hatos Libres oficiales ubicados en ambos estados. Esto ha provocado confusión en aquella región. Todo esto es debido a que Tarjeta y Rivanol (al igual que FPA y ELISA-LPS en leche) miden anticuerpos anti LPS-O generando falsos positivos por reacciones cruzadas.
Someter Rivanoles positivos al Hapteno descartaría falsos positivos por S19 y por las reacciones cruzadas existentes a nivel mundial.
El 25 de Marzo la S.D.R. del Gobierno del Estado de Chihuahua, publica en el Periódico Oficial el Acuerdo SDR-AC-150/2017 por el que se expide el “Protocolo para la Inspección y Análisis de la Calidad e Inocuidad de la Leche”, el cual incluye la prueba de Anillo en leche como método de control de brucelosis para el ingreso de leche a su estado, prueba oficial desarrollada en 1937 que mide anticuerpos anti LPS-O. En publicación del Siglo de Torreón de fecha 19 de abril 2017 menciona la afectación a 10 establos de Coahuila y Durango por un volumen de 600 mil litros de leche desechada, y 1500 personas en riesgo de perder su empleo. En fecha 17 de mayo, el periódico Puente Libre, de Cd, Juarez, Chih. da constancia de la devolución de 221 mil litros en el retén ubicado en Cd. Jiménez, Chih., proveniente de cuatro grandes establos de la región lagunera. Si ese protocolo incluyera HN como prueba de Control Interno para evaluar la leche en su retén, sólo rechazaría las pipas que realmente contengan Brucella, evitando pérdidas a sus empresarios que industrializan leche, y a aquellos productores lecheros de la región lagunera que son Hatos Libres, pero víctimas de las reacciones cruzadas con LPS-O que les generan Anillo en leche "falso positivo", con su consecuente y fuerte pérdida de la pipa.
En la Comarca Lagunera ha habido muchos avances en el control y erradicación de brucelosis; gran parte de esos avances se logró a través de excelentes pruebas como Fluorescencia Polarizada y ELISA-LPS en leche. En su momento, ésta fue una buena opción técnicamente, debido a la alta sensibilidad de ambas pruebas, y económicamente debido al precio accesible por su utilización de forma masiva. Sin embargo, la principal limitante de éstas pruebas, es que miden anticuerpos anti LPS-O en leche y suero sanguíneo, lo que ha generado alrededor de 100 mil vacas segregadas como hato positivo en esta región, de las cuales un 20% - 50% son positivas a LPS-O debido otras causas. Esto sucedió debido a que lamentablemente, en aquel momento no existía la tecnología de punta para distinguir reacciones cruzadas, lo que hoy es posible y que aún permitiría rescatar un gran número de esos animales segregados.
Algunas recomendaciones de LBA México:
*La intermitencia de LPS-O, NO significa que la Brucella se esconde. Si no que esta fluctuación se debe principalmente a las reacciones cruzadas, y en ocasiones al contacto con animales infectados y por anticuerpos vacunales.
*La Brucella, ocasionalmente se esconde en animales infectados, pero eso sólo sucede en un bajísimo porcentaje.
Si se mide mensualmente un animal infectado durante 12 meses con HN y LPS-O, sólo en 1 muestreo podría resultar negativo en ambos anticuerpos. Por lo tanto, ni LPS-O ni HN fluctúan en un animal infectado.
*NO elimine un FPA Positivo: éste sólo le indica presencia del primer anticuerpo: LPS-O. Como criterio de eliminación, debe confirmar el segundo anticuerpo: Hapteno Nativo (HN).
*Elimine los HN positivos: ya no hay duda, es Brucella.
*Para erradicar Brucella eficientemente, sólo se debería segregar animales positivos a Hapteno Nativo (HN).
*Un tanque de leche positivo a ELISA LPS o Anillo en leche, NO necesariamente es leche brucelosa.
*Un tanque de leche positivo a Hapteno Nativo (HN), es leche con Brucella.
*De oportunidad al animal LPS-O Positivo: espere 2-90 días a que éste anticuerpo disminuya; si era una reacción cruzada, nuevamente será negativo a FPA o Tarjeta. Si continúa positivo a LPS-O, entonces confírmelo con Hapteno Nativo (HN).
*Haga NADA: Si su Hato Negativo le genera tanque de leche positivo en ELISA LPS o Anillo en leche, es debido a la fluctuación de LPS-O. Sólo debe esperar (1-3 semanas) a que disminuyan los niveles de LPS-O y su tanque regresará a ser negativo. Si éste persiste, entonces muestree y segregue los positivos a FPA, para posteriormente confirmarlos con HN. Esto contribuye a disminuir el estress con su consecuente pérdida de producción, así como gastos innecesarios.
Su Hato Positivo ¡NO es totalmente positivo!
*Repita FPA o Tarjeta, y encontrará un mínimo de 10% negativo; esto se debe a que disminuyeron los anticuerpos anti LPS-O debidos a reacciones cruzadas y/o por contacto. Segréguelo y siga monitoreándolo, retirando aquellos que fluctúen nuevamente a LPS-O positivo, y siempre confirmándolos con HN. La leche de estos animales puede continuar positiva durante 1-3 semanas, pero finalmente se tornará negativa a ELISA LPS y/o a Anillo en leche.
*El restante 90% positivo a FPA, confírmelo con HN y elimine los animales HN positivo. Lo que resulte HN negativo segréguelo y siga monitoreándolo durante 2-90 días hasta que disminuyan gradualmente los anticuerpos contra LPS-O debidos al contacto prolongado con la infección y/o reacción cruzada. Aquellos animales que NO son brucelosos, se irán convirtiendo en FPA o Tarjeta negativa. Mientras tanto, es necesario confirmar con HN cada 2-3 semanas para descartar aquellos infectados que no se habían manifestado.
Evaluar el tanque de leche con ELISA HAPTENO NATIVO (HN), permite identificar los corrales con animales verdaderamente infectados, evitando gastos por muestreos innecesarios y con su consecuente pérdida de producción, pipas y precios de leche castigados injustamente por LPS-O de otras bacterias, así como, evitar la eliminación de animales ¨falsos positivos¨.
La ELISA HAPTENO NATIVO (HN) en leche y suero sanguíneo, es una innovación tecnológica que permite obtener leche libre de Brucella sin que LPS-O genere confusión, se erradicaría la enfermedad de manera eficiente, precisa, conservadora, no-agresiva con sus animales… y que debería estar en la NOM como prueba confirmatoria de brucelosis para beneficio de todo el sector agropecuario.
